用 BamHI切割一重組質(zhì)粒 DNA 分子并從中分離純化了兩個 DNA片段,一段長400bp,另一段長 900bp?,F(xiàn)在希望將這兩個片段重新連接起來,得到如圖 1 所示的結果。
于是將這兩種片段混合起來,并在連接酶的存在下進行溫育,分別在 30 分鐘和 8 小時取樣進行凝膠電泳分析,令人驚訝的是,連接產(chǎn)物并非是理想中的 1.3kb的重組分子,而是一種復雜的片段模式(圖 A)。同時發(fā)現(xiàn)隨著溫育時間的延長,較小片段的濃度逐漸降低,大片段的濃度逐漸增加。如果用 BamHI來切割連接后的混合物,則起始的片段可以重新產(chǎn)生(圖 A)。
從凝膠中分離純化出 1.3kb 的片段,并取出一部分用 BamHI進行切割,以檢查它的結構。正如預料的一樣,出現(xiàn)了兩個原始的帶(圖 B)。但是用 EcoRI切割另一部分樣品,希望能夠產(chǎn)生兩個 300bp 和一個長度為 700bp 的核苷酸片段,然而,凝膠電泳的結果,令人驚奇(圖 B)。
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