問(wèn)答題

用 BamHI切割一重組質(zhì)粒 DNA 分子并從中分離純化了兩個(gè) DNA片段,一段長(zhǎng)400bp,另一段長(zhǎng) 900bp?,F(xiàn)在希望將這兩個(gè)片段重新連接起來(lái),得到如圖 1 所示的結(jié)果。  
于是將這兩種片段混合起來(lái),并在連接酶的存在下進(jìn)行溫育,分別在 30 分鐘和 8 小時(shí)取樣進(jìn)行凝膠電泳分析,令人驚訝的是,連接產(chǎn)物并非是理想中的 1.3kb的重組分子,而是一種復(fù)雜的片段模式(圖 A)。同時(shí)發(fā)現(xiàn)隨著溫育時(shí)間的延長(zhǎng),較小片段的濃度逐漸降低,大片段的濃度逐漸增加。如果用 BamHI來(lái)切割連接后的混合物,則起始的片段可以重新產(chǎn)生(圖 A)。  
從凝膠中分離純化出 1.3kb 的片段,并取出一部分用 BamHI進(jìn)行切割,以檢查它的結(jié)構(gòu)。正如預(yù)料的一樣,出現(xiàn)了兩個(gè)原始的帶(圖 B)。但是用 EcoRI切割另一部分樣品,希望能夠產(chǎn)生兩個(gè) 300bp 和一個(gè)長(zhǎng)度為 700bp 的核苷酸片段,然而,凝膠電泳的結(jié)果,令人驚奇(圖 B)。

在原始連接混合物中為什么有如此多的帶?

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