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問答題用 EcoRI和 HindⅢ分別切割同一來源的染色體 DNA，并進(jìn)行克隆，在前者的克隆中篩選到 A基因，但在后者的克隆中未篩選到 A基因，請說明原因。

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1.問答題一個攜帶有氨芐和卡那霉素抗性基因的質(zhì)粒被僅在卡那霉素基因中有識別位點(diǎn)的EcoRI消化。消化物與酵母 DNA 連接后轉(zhuǎn)化對兩種抗生素都敏感的 E.coli 菌株。（1）利用哪一種抗生素抗性選擇接受了質(zhì)粒的細(xì)胞？（2）怎樣區(qū)分接受了插入酵母 DNA的質(zhì)粒的克??？

參考答案：

（1）選擇Amp^r的轉(zhuǎn)化子；
（2）所需的克隆是Amp^r和Kan^r。任何能夠抗這兩種藥物的克隆都是自連的非重組質(zhì)粒。

2.問答題插入失活和插入表達(dá)法篩選重組體的主要差別是什么？

參考答案：主要差別是：插入失活法是直接根據(jù)失活基因的表型變化來篩選重組體；插入表達(dá)是根據(jù)一個基因的失活引起另一個基因的表達(dá)表型來選...

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3.問答題切口移位（nick translation）標(biāo)記探針的主要步驟有哪些？

參考答案：（1）DNaseI造成切口；
（2）DNA聚合酶Ⅲ的 5’3’外切核酸酶進(jìn)行切割；

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4.問答題你在做Southern 印跡分析，并且剛完成了凝膠電泳這一步。根據(jù)方案，下面一步驟是用 NaOH溶液浸泡凝膠，使 DNA變性為單鏈。為了節(jié)省時(shí)間，你略過了這一步，直接將DNA從凝膠轉(zhuǎn)至硝酸纖維素膜上。然后用標(biāo)記探針雜交，最后發(fā)現(xiàn)放射自顯影片是空白。錯在哪里？

參考答案：如果你的雜交探針是雙鏈的，可能因?yàn)樵诩尤腚s交混合物之前忘記將探針變性而得到空白的放射自顯影結(jié)果。

5.問答題點(diǎn)印跡與Southern 印跡相比，有何優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)？

參考答案：兩種技術(shù)都可用于分析混合 DNA樣品中是否存在能與特定探針雜交的序列。點(diǎn)雜交比 Southern&#...

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