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高等教育自學(xué)考試(自考)

問(wèn)答題 為了繪制長(zhǎng)為 3．0kb BamHⅠ限制性片段的限制性圖譜，分別用 EcoRI、HpaⅡ、EcoRI+HpaⅡ消化這一片段的三個(gè)樣品，然后通過(guò)凝膠電泳分離 DNA 片段，溴化乙錠染色后觀察 DNA帶型（圖 15．2）。請(qǐng)根據(jù)這些結(jié)果，繪制一個(gè)限制性圖譜，要標(biāo)明 EcoRI和 HpaⅡ識(shí)別位點(diǎn)間的相對(duì)位置，以及它們之間的距離（kb）。

參考答案： 圖 A15．2是 BamHI片段的限制性圖譜。倒裝法繪圖是同樣有效的，制作這種圖譜的一種方法如下：畫一條適當(dāng)長(zhǎng)度的線段表...

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1.問(wèn)答題 在細(xì)菌質(zhì)粒 pBPI的四環(huán)素抗性基因 tet^R的中間有一個(gè) HindⅡ的切點(diǎn)。用 Hind Ⅲ切割果蠅基因組 DNA，以 pBPl 為載體構(gòu)建基因組文庫(kù)。分子雜交證明克隆 15 帶有果蠅的目的基因。用 Hind Ⅲ和 EcoRV對(duì)克隆 15 進(jìn)行了酶切分析，電泳結(jié)果如圖 15．1（用酶切的 pBPl質(zhì)粒 DNA作對(duì)照），旁邊標(biāo)出了片段的大小。

如果用克隆在另一個(gè)與 pBPl完全不同源載體上的四環(huán)素抗性基因作為探針進(jìn)行 Southern 印跡雜交，預(yù)測(cè)上述電泳圖會(huì)出現(xiàn)什么樣的雜交帶？

參考答案：除 No.2 的2.5kb，No.6 的1.5kb 和1.0kb 沒(méi)有帶外，其他都有帶。

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2.問(wèn)答題 在細(xì)菌質(zhì)粒 pBPI的四環(huán)素抗性基因 tet^R的中間有一個(gè) HindⅡ的切點(diǎn)。用 Hind Ⅲ切割果蠅基因組 DNA，以 pBPl 為載體構(gòu)建基因組文庫(kù)。分子雜交證明克隆 15 帶有果蠅的目的基因。用 Hind Ⅲ和 EcoRV對(duì)克隆 15 進(jìn)行了酶切分析，電泳結(jié)果如圖 15．1（用酶切的 pBPl質(zhì)粒 DNA作對(duì)照），旁邊標(biāo)出了片段的大小。

繪制含有插入片段和不含插入片段時(shí)的 pBPl 的限制性圖譜，并標(biāo)明四環(huán)素抗性基因的位置；

參考答案：

3.問(wèn)答題計(jì)算下列三種酶各自在某染色體 DNA 序列上識(shí)別位點(diǎn)間的平均距離：

參考答案：

4.填空題DNA連接酶的單位通常用 Weiss 單位表示，一個(gè) Weiss單位是：（）。

參考答案：在37℃下20分鐘內(nèi)催化焦磷酸交換1nmol32p到ATP所需要的酶量

5.填空題原核生物主要有兩種類型的 DNA連接酶：E．coliDNA連接酶和 T4DNA 連接酶。基因工程中使用的主要是 T4DNA連接酶，它是從 T4 噬菌體感染的 E．coli 中分離的種單鏈多肽酶，分子量為——』Oa，由 T4 噬菌體基因——編碼。E．coli DNA連接是由大腸桿菌基因一編碼，也是一條多肽鏈的單體，分子量為（）kDa。這兩DNA 連接酶有兩個(gè)重要的差異：第一是它們?cè)诖呋磻?yīng)中所用的能量來(lái)源不同，TDNA連接酶用（），而 E．coli DNA連接酶則用（）作為能源。第是它們催化平末端連接的能力不同，在正常情況下只有T4DNA連接酶能夠連接平末端E．coliDNA連接酶則不能。即使是調(diào)整反應(yīng)條件，E．coli DNA連接酶催化平末端連接效率也只有 T4 DNA連接酶的（）。

參考答案：68、30、51、74；ATP；NAD；1／100

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