①自身引導(dǎo)合成法 ②置換合成法 ③PCR合成法 ④快速擴(kuò)增cDNA末端法 ⑤雙鏈cDNA末端的處理 ⑥cDNA與載體的連接
主要原因有：酶濃度太高；高PH；低鹽；含Mn2+、Cu2+等非Mg2+金屬離子；甘油濃度高于5%；存在某些有機(jī)溶劑。
